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Function of the carrier ampholytes in the isoelectric focusing

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Description
Deutsch: Zu A) Ohne angelegtes Feld sind die Ampholytmoleküle ungeordnet im Gel. Überall im Gel ist der pH-Wert identisch (z.B. pH = 7) Die Moleküle, die einen höheren isoelektrischen Punkt (pI) als der pH-Wert der Flüssigkeit besitzen, sind positiv geladen (q > 0). Diejenigen Ampholytmoleküle deren pI kleiner als der umgebende pH-Wert ist, besitzen eine negative Ladung (q < 0). Je größer der Unterschied zwischen pI und dem pH-Wert desto höher ist der Betrag der Ladung.

Zu B) Legt man eine Spannung an, so werden positiv geladene Moleküle zum (+)-Pol (Kathode) und negativ geladene Moleküle zum (-)-Pol gezogen. Es kommt zu einer Sortierung der Ampholytmoleküle nach ihrem pI. Am Ort der Aufkonzentration sorgen sie auch für einem pH-Wert der ihrem pI-Wer enmtspricht. Dadurch beeinflussen die Trägerampholyte auch die Molekülladung anderer Trägerampholytmoleküle. Insgesamt beginnt sich ein pH-Gradient auszubilden.

Zu C) Die Moleküle konzentrieren sich dort auf, wo der pH-Wert ihrem pI entspricht. Dort sind sie dann nicht mehr geladen (q = 0). Insgesamt entsteht so ein sich selbst stabilisierender pH-Gradient. Diffundiert ein Molekül weg, so liegt es wieder geladen vor und wird durch den Strom zurück transportiert.
English: A) Without electrical current the carrier ampholyte molecules are unsortet. The pH is the same, in the whole gel. The charge of each molecule (q) depends of the isoelectrical point and the surrounding pH. If pI > pH => q > 0. If pI < pH => q > 0

B) Starting of the electrophoresis. The carrier ampholytes begin to sort und induce a pH which ist identical to their pI.

C) The carrier ampholytes have produced a self consistent field. They have reached the location, where they are uncharged (q = 0). A pH gradient has been established inside the gel.
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Source Own work
Author Andi schmitt

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